做克隆时,请问在引物前加的一段保护碱基和内切酶序列需要和cDNA互补吗?

做克隆时,请问在引物前加的一段保护碱基和内切酶序列需要和cDNA互补吗? 克隆设计引物插入酶切位点的问题我要对真菌的全序列进行克隆,设计引物时是不是讲酶切位点插入到5’端就可以了?加的保护基团在酶切位点之前加就可以吗,它是随便的三个碱基吗?限制性 我从PMD18-T上克隆目的基因,用的是Ecor I 和Not I酶切位点,引物Not I只有一个保护碱基,这样可以吗? 克隆引物和表达时引物设计的区别 PCR时引物的概念包括加进去的酶切位点和保护碱基嘛?算进引物的长度吗?一块分析嘛?我设计的下游引物只有15个碱基,但primer5上的长度18个,如果我删去三个就不配对了（只是下游引物）,影响 引物3 端前几个碱基不配对还能扩出产物吗?我是说在PCR时,引物出现错配到300bp,但它的3端前3个碱基没和300bp处配上.引物也可以在300bp处扩吧?只是扩时是从引物的第4个也就是和模板开始配对的 请教各位我设计引物加了酶切位点和六个保护碱基,结果扩出来的片段短了,缺少我之前设计引物那段互补片段请教各位我设计引物能扩增出目的片段,测序结果正确,设计表达引物直接在上面加 已知一个基因的mRNA和cDNA,我想克隆此基因,进行转染表达,但是设计的引物无法扩增出目的片段……急求!我目的片段大小为2800,载体为eGFP-N1,设计引物中,我是取了ATG开始的前20个左右的碱基,加 引物加了保护碱基和酶切位点（共14个碱基）后退火温度需要调整吗? 设计引物的时候,酶切位点的前面的保护碱基应该怎么加,遵循什么原则. 任何PCR引物都需要加保护碱基嘛? 再设计引物时,添加酶切位点和标签后,正反两个引物相差20个碱基,但在添加前相差不大, 2OD的引物怎么稀释?我要做RAPD,选的随机引物都是每条10个碱基的.上海生工的引物合成报告单上显示2OD/管,请问该怎么加灭菌水? 设计引物加哪个酶切位点pQE30表达载体上常用的酶切位点有BamHI、 SacI 、KpnI 、SmaI 、PstI、 HindIII ,现预克隆的一段基因上有EcoRI、HindIII、SacI、AccI、PstI等酶切位点,那么在设计引物时候可以在 酶切位点与保护碱基加入如果有ATG怎么办?我克隆一个完整的CDS,有ATG,设计的引物上游直接以ATG开始,而下游直接以TTA开始（与TAA互补）,那么上游加入酶切位点与保护碱基时,如果有ATG怎么办? 克隆2500个碱基,该设计多长的引物呢?我准备克隆2500个碱基,引物是不是应该长一点? 请问您一个基因的全长已经克隆出来,怎样进行验证呢?从ATG和TGA设引物重新扩增,还是从非编区设引物呢我已经从ATG和TGA设引物了，挑了四五个单克隆，可是每个测序结果都有几个碱基突变， 带酶切位点的引物设计问题带酶切位点的引物设计时计算Tm值,退火温度及GC含量时是否要把酶切位点和保护碱基计算在内?我觉得不用,因为酶切位点可以不用跟模板结合,